معلومة

مخازن * # - علم الأحياء

مخازن * # - علم الأحياء



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

مخازن

نظرًا لأن التغيرات في الأس الهيدروجيني يمكن أن تؤثر بشكل كبير على وظيفة العديد من الجزيئات الحيوية ، فقد طورت الكائنات أحادية الخلية ومتعددة الخلايا وسائل مختلفة لحماية نفسها من التغيرات في الأس الهيدروجيني. إحدى هذه الآليات هي استخدام الجزيئات الصغيرة التي يمكن تصنيفها ، بناءً على خصائصها الكيميائية مخازن. مخازن عادة ما تكون جزيئات صغيرة يمكنها ربط وفك البروتونات بشكل عكسي في المحلول. إذا كان الرقم الهيدروجيني في بيئة أقل من pKa لمجموعة وظيفية قابلة للبروتونات على الجزيء العازل ، فإن هذه المجموعة سوف تميل إلى أن تصبح بروتونية وبالتالي "تزيل" بروتونًا من المحلول. بدلاً من ذلك ، إذا كان الرقم الهيدروجيني في بيئة ما أعلى من pKa لنفس المجموعة الوظيفية القابلة للبروتونات على جزيء العازلة ، فإن هذه المجموعة ستميل إلى أن تصبح منزوعة البروتونات أو تبقى ، مما يقلل من الرقم الهيدروجيني المحلي.

من الجسم يتم صيانتها بعناية في النطاق الضيق المطلوب للبقاء على قيد الحياة. الحفاظ على درجة حموضة الدم ثابتة أمر بالغ الأهمية لرفاهية الشخص. يتضمن الحاجز الذي يحافظ على الرقم الهيدروجيني لدم الإنسان حمض الكربونيك (H2CO3) وأيون البيكربونات (HCO3–) وثاني أكسيد الكربون (CO2). عندما تتحد أيونات البيكربونات مع أيونات الهيدروجين الحرة وتصبح حمض الكربونيك ، تتم إزالة أيونات الهيدروجين ، مما يؤدي إلى تعديل تغيرات درجة الحموضة. وبالمثل ، يمكن تحويل حمض الكربونيك الزائد إلى غاز ثاني أكسيد الكربون والزفير عبر الرئتين. هذا يمنع الكثير من أيونات الهيدروجين الحرة من التراكم في الدم ويقلل بشكل خطير من درجة الحموضة. وبالمثل ، إذا تم إدخال الكثير من OH- في النظام ، فسوف يتفاعل حمض الكربونيك معه لتكوين البيكربونات ، مما يقلل من الرقم الهيدروجيني. بدون هذا النظام العازل ، سيتذبذب الرقم الهيدروجيني للجسم بما يكفي لتعريض البقاء على قيد الحياة للخطر.

شكل 1. يوضح هذا الرسم البياني التخزين المؤقت لمستويات درجة الحموضة في الدم في الجسم. توضح الأسهم الزرقاء عملية رفع الأس الهيدروجيني كلما زاد إنتاج ثاني أكسيد الكربون.

ومن الأمثلة الأخرى للمخازن المؤقتة مضادات الحموضة المستخدمة لمكافحة حموضة المعدة الزائدة. تعمل العديد من هذه الأدوية التي لا تستلزم وصفة طبية بنفس الطريقة التي تعمل بها مخازن الدم ، وعادةً ما تحتوي على أيون واحد على الأقل قادر على امتصاص الهيدروجين وتعديل درجة الحموضة ، مما يخفف الألم لمن يعانون من "الحموضة المعوية" بعد تناول الطعام. بالإضافة إلى العديد من الخصائص المفيدة للمياه ، فإن خصائصه الفريدة التي تساهم في هذه القدرة على موازنة الأس الهيدروجيني ضرورية لاستمرار الحياة على الأرض.


TAE العازلة

TAE العازلة عبارة عن محلول منظم يحتوي على خليط من قاعدة Tris وحمض الخليك و EDTA.

في البيولوجيا الجزيئية ، يتم استخدامه في الرحلان الكهربي [اغروس) عادةً لفصل الأحماض النووية مثل DNA و RNA. [1] وهي مكونة من محلول تريس أسيتات ، عادة عند درجة الحموضة 8.3 ، و EDTA ، الذي يعزل الكاتيونات ثنائية التكافؤ. يتمتع TAE بسعة عازلة أقل من TBE ويمكن أن يستنفد بسهولة ، لكن الحمض النووي الخطي المزدوج الجديلة يعمل بشكل أسرع في TAE.

في السابق ، قام Brody & amp Kern بتبسيط المخازن المؤقتة الكهربي عن طريق استبدال المخازن المؤقتة TBE و TAE لوسائط موصلة أكثر كفاءة وأقل تكلفة في أنظمة الهلام. [2]

يتم استخدام المخزن المؤقت TAE (Tris-acetate-EDTA) كمخزن مؤقت قيد التشغيل وفي مواد هلامية agarose. [3] كما تم وصف استخدامه في تغيير طبيعة طرق الفصل الكهربائي للهلام المتدرج لتحليل الطفرات واسعة النطاق. [4] تم استخدام TAE بتركيزات مختلفة لدراسة تنقل الحمض النووي في المحلول مع وبدون كلوريد الصوديوم. [5] ومع ذلك ، فإن التركيزات العالية من كلوريد الصوديوم (والعديد من الأملاح الأخرى) في عينة الحمض النووي تؤخر حركتها. قد يؤدي هذا إلى تفسيرات غير صحيحة لنمط ربط الحمض النووي الناتج.

يتم تحضير TAE buffer بشكل شائع كمحلول مخزون 50 × للاستخدام المعملي. يمكن تحضير محلول مخزون 50 × عن طريق إذابة 242 جم من قاعدة Tris في الماء ، وإضافة 57.1 مل من حمض الأسيتيك الجليدي ، و 100 مل من محلول EDTA سعة 500 ملي مولار (درجة الحموضة 8.0) ، ورفع الحجم النهائي حتى 1 لتر. يمكن تخفيف محلول المخزون هذا بنسبة 49: 1 بالماء لعمل محلول 1 ×. سيحتوي محلول 1 × على 40 ملي مولار تريس ، 20 ملي مولار حمض أسيتيك ، و 1 ملي مول EDTA.

لا. اسم لكل 1 مول الحل الرئيسي 50× 1 × الحل 1X
1 قاعدة تريس 121.1 جرام / لتر 2 م 242.2 جم / لتر 40 ملم 4.844 جم / لتر
2 حمض الاسيتيك 57.1 مل / لتر 1 م 57.1 مل / لتر 20 ملم 1.21 مل / لتر
3 ثنائي هيدرات ملح ثنائي الصوديوم EDTA 372.24 جم / لتر 50 مم 18.612 جم / لتر 1 ملم 0.372 جم / لتر

2 م = 2000 مم لذلك 2000 مم / 50 = 40 مم ل 1 ×.
1 م = 1000 مم لذا 1000 مم / 50 = 20 مم ل 1 ×.
50 مم / 50 = 1 مم لـ 1 ×.

بادئ ذي بدء ، يجب إذابة هذه المكونات في 500 مل ، ثم تحضيرها حتى 1000 مل.
ملاحظة: سيستغرق EDTA وقتًا أطول لتذوب ، لذلك أثناء حل EDTA ، استخدم محرك مغناطيسي (كميات قليلة من EDTA في 3 أو 4 مرات).


متعادل

في كيمياء ، المخزن المؤقت هو نظام ، عادة ما يكون مائيًا (ماء ) المحلول ، الذي يقاوم وجوده الرقم الهيدروجيني يتغير عند إضافة حمض أو قاعدة إليه.

عادةً ما تؤدي إضافة الحمض إلى المحلول إلى خفض الرقم الهيدروجيني الخاص به وإضافة قاعدة ستؤدي إلى رفع الرقم الهيدروجيني. ومع ذلك ، إذا كان المحلول عبارة عن محلول منظم ، فسيتم تغيير الرقم الهيدروجيني الخاص به إلى حد أقل بكثير مما هو متوقع من كميات الحمض أو القاعدة التي تمت إضافتها. ما يسمى ب "الأسبرين المخزن" ليس في الحقيقة عازلة ، لأنه لا يقاوم الأحماض والقواعد . إنه ببساطة أسبرين ممزوج بمركب أساسي ، مثل المغنيسيوم كربونات أو هيدروكسيد الألومنيوم الذي يعمل على تحييد بعض حموضة المعدة.

الكل تقريبا تفاعلات كيميائية التي تحدث في محلول مائي - أي تقريبًا جميع التفاعلات الكيميائية - حساسة لتركيزات هيدروجين أيونات وأيونات الهيدروكسيد ، أي إلى الرقم الهيدروجيني للمحلول. هذا لأن أيونات الهيدروجين والهيدروكسيد هي أيونات الماء نفسه. على وجه الخصوص ، فإن العديد من العمليات الكيميائية الحيوية الضرورية للحياة حساسة جدًا لحموضة سوائل الجسم المختلفة. تحافظ مجموعة متنوعة من أنظمة العازلة الطبيعية على قيم الأس الهيدروجيني في الجسم ضمن الحدود الضرورية للصحة. على سبيل المثال ، يحتفظ نظام من عدة محاليل برقم هيدروجيني للإنسان دم بين 7.33 و 7.43 في الشخص السليم. يمكن أن يكون الرقم الهيدروجيني للدم أقل من 7.0 أو أعلى من 7.8 قاتلاً.


يحتوي برنامج تلفزيوني على العديد من الاستخدامات لأنه متساوي التوتر وغير سام لمعظم الخلايا. وتشمل هذه الاستخدامات تخفيف المادة وشطف حاوية الخلايا. يستخدم برنامج تلفزيوني مع EDTA أيضًا لفك ارتباط الخلايا المتكتلة والمرفقة. ومع ذلك ، لا يمكن إضافة المعادن ثنائية التكافؤ مثل الزنك لأن هذا سيؤدي إلى هطول الأمطار. بالنسبة لهذه الأنواع من التطبيقات ، يوصى باستخدام مخازن Good. لقد ثبت أن برنامج PBS بديل مقبول لوسيط نقل الفيروس فيما يتعلق بنقل وتخزين فيروسات الحمض النووي الريبي ، مثل SARS-CoV-2 [1]

هناك العديد من الطرق المختلفة لإعداد حلول PBS (إحداها هي محلول Dulbecco الملحي المخزن بالفوسفات (DPBS) ، والذي يحتوي على تركيبة مختلفة عن تلك الخاصة بـ PBS القياسي [2]). لا تحتوي بعض التركيبات على البوتاسيوم والمغنيسيوم ، بينما تحتوي الصيغ الأخرى على الكالسيوم و / أو المغنيسيوم (اعتمادًا على ما إذا كان المخزن المؤقت يستخدم على الأنسجة الحية أو الثابتة أم لا: هذا الأخير لا يتطلب KCl أو MgCl2 ).

التركيب الأكثر شيوعًا لبرنامج تلفزيوني (1 ×)
ملح التركيز (مليمول / لتر) التركيز (جم / لتر)
كلوريد الصوديوم 137 8.0
بوكل 2.7 0.2
نا2HPO4 10 1.42
KH2ص4 1.8 0.24

ابدأ بـ 800 مل من الماء المقطر لإذابة جميع الأملاح. أضف الماء المقطر إلى الحجم الإجمالي 1 لتر. سيكون للنتيجة 1 × PBS تركيز نهائي قدره 157 ملي مولار Na + ، 140 ملي مولار Cl - ، 4.45 ملي مولار K + ، 10.1 ملي مولار HPO4 2− ، 1.76 مم H2ص4 - ودرجة الحموضة 7.96. أضف 2.84mM من HCl لتحويل المخزن المؤقت إلى 7.3 مم HPO4 2− و 4.6 ملي مولار H2ص4 - للحصول على درجة حموضة نهائية 7.4 و Cl - تركيز 142 ملي مولار.

بروتوكول كولد سبرينغ هاربور [3]
كاشف ميغاواط الكتلة (جم) 10 × [م] 10 × الكتلة (جم) 5 × [م] 5 × الكتلة (ز) 1 × [م] 1 ×
نا2HPO4 141.95897 14.1960 0.1000 7.0980 0.0500 1.41960 0.0100
KH2ص4 136.08569 2.4496 0.0180 1.2248 0.0090 0.24496 0.0018
كلوريد الصوديوم 58.44300 80.0669 1.3700 40.0335 0.6850 8.00669 0.1370
بوكل 74.55150 2.0129 0.0270 1.0064 0.0135 0.20129 0.0027
الرقم الهيدروجيني = 7.4

7.4. عند عمل محاليل عازلة ، فمن الممارسات الجيدة دائمًا قياس الأس الهيدروجيني مباشرةً باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني. إذا لزم الأمر ، يمكن تعديل الأس الهيدروجيني باستخدام حمض الهيدروكلوريك أو هيدروكسيد الصوديوم.

يمكن أيضًا تحضير PBS باستخدام أقراص أو أكياس PBS العازلة المصنوعة تجاريًا. [4]

إذا تم استخدامه في زراعة الخلايا ، يمكن الاستغناء عن المحلول في قسامات وتعقيمها عن طريق التعقيم أو الترشيح. قد لا يكون التعقيم ضروريًا اعتمادًا على استخدامه. يمكن تخزين برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة أو في الثلاجة. ومع ذلك ، قد تترسب محاليل المخزون المركز عند تبريدها ويجب حفظها في درجة حرارة الغرفة حتى يذوب الراسب تمامًا قبل الاستخدام.


مخازن وكواشف جاهزة للاستخدام

بالإضافة إلى الكتالوج الخاص بنا ، تقدم Boston BioProducts خدمات مخصصة من خلال فريقنا المتمرس من العلماء والمتخصصين في تطوير المنتجات.

طلب عينة

جرب منتجًا مجانيًا من الكتالوج الخاص بنا قبل بدء مشروعك البحثي التالي.

أردت فقط أن أشكركم يا رفاق على خدمة العملاء التي لا تشوبها شائبة. نطلب كميات كبيرة من المخازن المؤقتة المختلفة وفي كل مرة تصل هذه المخازن المؤقتة في الوقت المحدد. إن جودة المخازن المؤقتة لا تقل أهمية ، ولم نشعر بخيبة أمل على هذه الجبهة أيضًا. جميع المخازن المؤقتة تلبي المواصفات الخاصة بنا باستمرار. شكرا جزيلا!

يوجين نيبليتسكي
معاهد نوفارتيس لأبحاث الطب الحيوي

منتجات عالية الجودة بسعر عادل.

بي تونغ
بريغهام ومستشفى النساء

مخازن موثوقة ، تحول سريع للغاية وخدمة عملاء جيدة جدًا.

يقدم فريق Boston BioProducts منتجات ممتازة بسعر رائع بالإضافة إلى خدمة عملاء استثنائية. كمختبر مبتدئ ، يعد الوقت والميزانية أمرًا بالغ الأهمية. لقد ساعدتنا Boston BioProducts في الحفاظ على كليهما.

جينو رومانو
علاجات السيليكون

إنني أقدر بصدق خدمة العملاء اللطيفة والفعالة ، ومستوى التفاصيل والمساءلة التي أظهرتها في حساباتي السابقة ، وموظفيك الودودين والمهنيين ، والطريقة التي تدير بها الأعمال ككل. لدي ، وسأواصل ، أوصي بخدمتك للشركات وجهات الاتصال الأخرى. أنا متأكد من أن فريقنا هنا في Cogen لن يكون أكثر رضا عن عملك ، ونتطلع إلى استمرار هذه العلاقة.


مخازن لطخة ويسترن

تعرف على المزيد حول المخازن المؤقتة المصممة خصيصًا لكل خطوة من خطوات معالجة واكتشاف اللطخة الغربية. نحن نقدم مجموعة واسعة من المخازن المؤقتة للحظر ، ومخازن الغسيل ، والمنظفات ، والمخازن المؤقتة لتجريد البقعة الغربية للمساعدة في توليد أفضل البيانات الممكنة من البقع الغربية.

استكشف مجموعة متنوعة من المخازن المؤقتة لمنع اللطخة الغربية لتحسين اكتشاف البروتينات المستهدفة

مصل وبروتين واحد منقى خالٍ من البيوتين

  • يؤدي أداءً جيدًا مع مجموعة واسعة من الأجسام المضادة ومجموعات الأجسام المضادة.
  • متوافق مع أنظمة الستربتافيدين
  • كتل في أقل من 15 دقيقة
  • الأفضل للبروتينات عالية الوفرة أو التقارب القوي للأجسام المضادة
  • خلفية عالية مع المخزن المؤقت الحالي للحظر
  • تجريد ونهب البقع الغربية
  • يحجب مواقع الربط الزائدة غير المحددة للمساعدة في تقليل تألق الخلفية ،
  • يعمل مع كل من النيتروسليلوز و PVDF منخفض التألق
  • خالي من المنظفات
  • كتل في 15-30 دقيقة
  • الإسفار النشاف الغربي
  • تصوير وتخزين بقع التألق الجافة

بروتينات الحليب الموضحة والمثبتة

  • استبدال عالي الأداء للمخازن المؤقتة للحليب محلية الصنع في تطبيقات النشاف الغربية
  • عمر تخزين طويل في درجة حرارة الغرفة
  • استخدمه عند مشاهدة خلفية عالية بالحليب الخالي من الدسم
  • تطبيقات الفلورسنت والإضاءة الكيميائية

مصل وبروتين سكري منقى خالٍ من البيوتين

  • لا تحتوي التركيبة القائمة على البروتين على أي جلوبولين مناعي أو زلال أو بيوتين داخلي ، مما يجعلها متوافقة في العديد من المواقف التي تفشل فيها عوامل الحجب التقليدية.
  • خالي من البيوتين للاستخدام مع نظام الستربتافيدين
  • كتل في أقل من 10 دقائق
  • خلفية عالية مع المخزن المؤقت الحالي للحظر
  • مفيد في طرق الكشف التي تشمل عينات الثدييات.
  • فعال بشكل خاص في التطبيقات التي تتضمن التصوير الفلوري
  • عينات الثدييات
  • الإسفار النشاف الغربي

الزلال المصل البقري المنقى

  • 10٪ حلول لألبومين مصل الأبقار عالي الجودة
  • يوفر البروتين المنقى الفردي فرصًا أقل للتفاعل المتبادل مع مكونات الفحص مقارنة بمحلول المصل أو الحليب
  • يستخدم عند استهداف البروتينات الفوسفورية
  • أفضل استخدام عند تخزين الأجسام المضادة المعاد استخدامها في مانع
  • يوفر المخزن المؤقت للحظر أحادي البروتين فرصًا أقل للتفاعل المتبادل مع مكونات الفحص مقارنة بمحلول المصل أو الحليب
  • استخدمه عند رؤية خلفية عالية مع حاصرات الحليب الخالية من الدسم
  • محلول 5٪ جاهز للاستخدام من الحليب المجفف الخالي من الدسم
  • الراحة - جاهزة للاستخدام
  • منتج أكثر اتساقًا على حاصرات محلية الصنع

مركب مانع للبروتين

  • يقلل أو يلغي التفاعل التبادلي المرتبط بمخازن الحجب القائمة على البروتين.
  • تتطلب توليفات العينات والأجسام المضادة القضاء على جميع البروتينات الحيوانية الخارجية المحتملة في نظام الفحص لتجنب التفاعل المتبادل أو إخماد وظيفة المسبار المطلوبة
  • استخدم عندما تسبب حاصرات البروتين خلفية عالية

العلاج الغشائي للوفرة المنخفضة أو الأجسام المضادة ذات النشاط المناعي الضعيف

  • المعالجة المسبقة لأغشية النيتروسليلوز
  • يقلل من كمية الجسم المضاد الأساسي المطلوب للتحقيق
  • استخدم عندما يكون الجسم المضاد الأولي أقل من 3 إلى 100 ضعف من الجسم المضاد الأولي مما هو مستخدم عادة للكشف عن البروتين محل الاهتمام

قبل البحث عن البروتينات ذات الأهمية ، يجب سد سطح الارتباط المتبقي للغشاء لمنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة. خلاف ذلك ، فإن الأجسام المضادة أو كواشف الكشف الأخرى سوف ترتبط بأي مواقع متبقية على الغشاء والتي عملت في البداية على شل حركة البروتينات محل الاهتمام. من حيث المبدأ ، يمكن استخدام أي بروتين لا يحتوي على ألفة ملزمة للمكونات المستهدفة أو المسبار في الفحص للحجب.

يمكن استخدام مجموعة متنوعة من المحاليل المعيارية التي تتراوح من الحليب أو المصل الطبيعي إلى البروتينات عالية النقاء لحجب المواقع الحرة على الغشاء. سوف يرتبط المخزن المؤقت للحظر المثالي بجميع المواقع المحتملة للتفاعل غير المحدد ، مما يلغي الخلفية تمامًا دون تغيير أو حجب الحاتمة لربط الجسم المضاد. يمكن أن يؤثر حظر المحاليل المعيارية على ارتباط وخصوصية الأجسام المضادة - لذا يلزم التحسين. لا يوجد بروتين واحد أو خليط من البروتينات يعمل بشكل أفضل لجميع تجارب اللطخة الغربية ، والاختبار التجريبي ضروري للحصول على أفضل النتائج الممكنة لمجموعة معينة من الأجسام المضادة ونوع الغشاء ونظام الركيزة.


النشاط النسبي لأنزيمات التقييد في المخازن المؤقتة العالمية والقاعدية

يتم تزويد إنزيمات التقييد الخاصة بنا بمخزن مؤقت عالمي مثالي (واحد من خمسة مخازن عالمية موضحة باللون الأزرق في الجدول أدناه). يتم تطبيع النشاط النسبي في كل من المخازن المؤقتة العالمية الأخرى إلى المخزن المؤقت الأمثل ، حيث يتم التعبير عن نشاط كل إنزيم في المخزن المؤقت الأمثل بنسبة 100٪. تشير القيم الموجودة في () إلى المخازن المؤقتة التي من المحتمل أن تتأثر بنشاط النجوم. من أجل تجنب هذه الآثار ، يوصى باستخدام المخازن المؤقتة المظللة باللون الأزرق أو الوردي.

يتم تزويد بعض الإنزيمات المحددة (AccIII و BalI و BcnI و BglI و Bpu1102I و Cfr10I و Eco52I و NruI و PshBI و SnaBI و SspI و TaqI و VpaK11BI) بمخزن أساسي متخصص للإنزيم المعين. تختلف تركيبات هذه المحاليل القاعدية باختلاف الإنزيم.

انزيم التقييد الأنشطة النسبية (٪)
إلمحكT + BSAالقاعدية ***
آاتي & lt20 & lt20 & lt20 & lt20 100 120
AccI 20 100 & lt20 (& lt20) 160 80
أكيي (260) 100 & lt20 20 200 160
AccIII (& lt20) (& lt20) 20 (80) (& lt20) 100
افاي 60 60 40 60 100 100
AflII 20 80* & lt20 & lt20 140 120
ألوي 100 100 & lt20 40 200 120
Aor13HI & lt20 20 & lt20 80 * 80 100
Aor51HI 80 100 & lt20 20 120 120
ابي 100 & lt20 & lt20 & lt20 & lt20 120
أبالي 100 20 & lt20 & lt20 120 120
افاي (& lt20) 100 20 40 100 120
افي 80 100 & lt20 20 100 100
بالي 20 20 & lt20 & lt20 40 100
بامهي (& lt20) & lt20 40 100 (& lt20) 80
باني (120) (120) 100 80 (100) 100
أنا & lt20 20 40 60 60 100
BglI & lt20 & lt20 20 40 & lt20 100
BglII & lt20 20 100 (100) (60) 100
أنا & lt20 20 40 100 20 120
BmeT110I & lt20 & lt20 20 100 & lt20 140
BmgT120I & lt20 & lt20 100 40 & lt20 240
بو 1102 ا & lt20 & lt20 & lt20 40 60 100
BspT104I 100 60 & lt20 & lt20 100 120
BspT107I & lt20 20 80 100 20 100
أنا 100 20 & lt20 & lt20 60 100
Bsp1407I 20 60 20 20 100 100
BssHII 100 100 60 20 140 100
BstPI (& lt20) (60) 100 (100) (100) 100
BstXI & lt20 40 100 & lt20 & lt20 120
Bst1107I (& lt20) 60 100 100 40 100
CFR10I (& lt20) (& lt20) (& lt20) 40 (20) 100
CLI 40 100 120 100 60 100
CpoI & lt20 & lt20 80 100 & lt20 100
دراي 100 100 60 100 80 80
EaeI 60 100 & lt20 & lt20 120 160
EcoO65I (20) (60) 60 * 40 40 100
إيكو 109 أ 100 60 & lt20 & lt20 100 160
ايكو ارى (20) (100) 100 (120) (80) 120
EcoRV (& lt20) (40) 100 (120) (40) 100
EcoT14I (& lt20) (40) 100 120 (60) 100
EcoT22I & lt20 20 100 (140) (20) 120
Eco52I & lt20 & lt20 & lt20 & lt20 & lt20 100
Eco81I & lt20 100 & lt20 & lt20 100 160
FbaI (& lt20) (& lt20) (80) 100 (20) 100
فوكي (20) (60) & lt20 & lt20 (200) 100
هايي 80 100 & lt20 80 140 100
هايييي 60 100 100 60 100 100
HapII 100 60 & lt20 & lt20 100 80
HhaI 80 100 100 120 120 100
HincII 20 100 20 40 100 80
هند III (60) 100 & lt20 200 (100) 80
HinfI 80 100 100 160 60 100
هين 1 40 80* & lt20 20 60 160
هبا & lt20 (40) 20 100 (80) 100
أنا 100 60 & lt20 & lt20 (100) 80
مبوي 20 40 60 100 40 100
مبوي 100 60 & lt20 & lt20 60 100
MflI 100 80 & lt20 & lt20 80 100
أنا 60 60 100 (100) 60 100
MspI 80 80 & lt20 100 100 80
موني (200) 100* & lt20 & lt20 160 100
MvaI (& lt20) (40) 80 100 (20) 120
ناي 100 & lt20 & lt20 & lt20 100 120
NcoI (40) (60) 20 60* (60) 160
NdeI & lt20 40 100 100 80 100
أنا (120) 100 & lt20 & lt20 (160) 100
لا (& lt20) (& lt20) 20** & lt20 (& lt20) 100
NruI 0 & lt20 20 20 & lt20 100
NsbI 40 20 & lt20 60 100 100
PmaCI 100 80 & lt20 & lt20 100 100
PshAI 20 40 & lt20 100 60 160
PshBI (20) (40) 20 40 40 100
PS1406I 20 60 & lt20 & lt20 100 100
PstI (& lt20) (60) 100 80 (20) 80
PvuI (& lt20) (20) (40) 80* (40) 120
PvuII (80) 100 40 & lt20 (40) 100
ساسي 100 60 & lt20 & lt20 80 80
SacII 40 20 & lt20 & lt20 100 40
سالي & lt20 & lt20 100 (20) & lt20 120
Sau3AI (60) 80 100 & lt20 (80) 100
ScaI (& lt20) (& lt20) 100 (60) (& lt20) 100
SfiI (40) 100 & lt20 & lt20 100 100
SmaI & lt20 & lt20 & lt20 & lt20 100 100
SmiI & lt10 & lt20 100 40 & lt10 100
سنابي (20) (40) & lt20 & lt20 (40) 100
SpeI (80) 100 80 100 (80) 100
SphI (20) (40) 100 120 (20) 100
Sse8387I (120) 60* & lt20 & lt20 (60) 100
SSPI (& lt20) (60) 40 (100) (80) 100
ستوي 60 100 60 80 140 100
تقي 40 80 60 60 80 100
Tth111I (20) 80 40 100 (80) 120
فان 91 & lt20 (20) 60 100 (60) 100
VpaK11BI & lt20 & lt20 60 (40) & lt20 100
XbaI & lt20 80* 20 & lt20 120 120
XhoI & lt20 60 100 160 60 100
XspI & lt20 60 & lt20 100 160 100

الأزرق: المخزن المؤقت المزود بإنزيم التقييد
اللون الوردي: يوصى باستخدام مخزن مؤقت بديل

* + 0.01٪ BSA & rarr 100٪ AflII، EcoO65I، FokI، Hin1I، MunI، NcoI، PvuI، SplI، Sse8387I، XbaI
** + 0.01٪ BSA + 01٪ Triton X-100 & rarr 100٪ NotI
*** تركيبات المخازن القاعدية خاصة بالإنزيم.


مخازن * # - علم الأحياء

PHEM (500 مل) 2x
18.14 جرام أنابيب
6.5 غ حبيس
3.8 جرام EGTA
0.99 جم MgSO 4
درجة الحموضة 7.0 واط / KOH

برنامج تلفزيوني (5 مرات في 500 مل)
20.45 جم كلوريد الصوديوم
0.465 جم بوكل
10.142 جم Na 2 HPO 4 * 7 ح2ا
0.545 جم KH 2 ص 4
الرقم الهيدروجيني 7.2

وسائل الإعلام المتصاعدة
20 م تريس درجة الحموضة 8.0
0.5 & # 37 N-propyl gallate
90 & # 37 الجلسرين
تخزينها في 4 درجة مئوية

PM العازلة *
100 مل 1 م أنابيب (100 ملي أنابيب الرقم الهيدروجيني = 6.9)
2 مل 1 M MgSO 4 ، (2 ملي MgSO 4 )
2 مل 0.5 م EGTA (1 ملم EGTA ،)
الماء المقطر إلى 900 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 6.9
الماء المقطر إلى 1 لتر
يخزن في 4 درجة مئوية

فالاب *
ضعي 50 غ من الفازلين ، و 50 غ من اللانولين ، و 50 غ من البارافين (كلها متوفرة من فيشر) في دورق بيركس سعة 1 لتر
يسخن على & quot؛ ضبط السرعة & quot؛ على لوح تسخين ، مع التحريك من حين لآخر ، حتى تذوب جميع المكونات وخلطها جيدًا
تصب في عدة برطمانات صغيرة ذات أغطية لولبية (سعة & # 12650 مل)
احفظه في درجة حرارة الغرفة

20 × نظام تجديد الطاقة *
150 ملي فوسفات الكرياتين (Boehringer & # 35127574)
2 مل من 100 ملي MgATP Stock (20 ملي ATP ، 20 ملي MgSO 4 )
40 مل 0.5 م EGTA (2 مم EGTA)
الماء المقطر إلى 10 مل
تفرز في 100 مل قسامات وتخزينها في -20 درجة مئوية

عازلة العزل *
20 مل 5 م كلوريد الصوديوم (0.1 مول كلوريد الصوديوم)
4 مل من 1 M MgSO 4 مخزون (4 ملي MgSO 4 )
2 مل من 0.5 م EDTA (1 ملم EDTA)
10 مل من 1 مليون حبيس (10 ملم حبيس)
الماء المقطر إلى 900 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0
الماء المقطر إلى 1 لتر
تخزينها في 4 درجة مئوية

عازلة عالية الملح *
120 مل من 5 م كلوريد الصوديوم (0.6 م كلوريد الصوديوم)
4 مل من 1 M MgSO 4 مخزون (4 ملي MgSO 4 )
2 مل من 0.5 م EDTA (1 ملم EDTA)
10 مل من 1 مليون حبيس (10 ملم حبيس)
الماء المقطر إلى 900 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0
الماء المقطر إلى 1 لتر
يخزن في 4 درجة مئوية

10 × العمود العازلة *
500 مل 1 م مخزون أنابيب (250 ملم أنابيب)
40 مل من 0.5 مليون سهم EGTA (10 ملم EGTA)
40 مل من 1 M MgSO 4 مخزون (5 ملي MgSO 4 )
الماء المقطر إلى 1800 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 6.7
الماء المقطر إلى 2 لتر
تخزينها في 4 درجة مئوية

عازلة التجانس *
300 مل PM عازلة
52.3 مجم PMSF (1mM PMSF)
3 غرام لوبيبتين (10 ملغ / مل من لوبيبتين)
300 مجم بيبستاتين أ (1 ميكروغرام / مل بيبستاتين أ)
3 مجم تام (10 ميكروغرام / مل تام)
تخلط جيدا لتذوب ، تستخدم على الفور

عازلة PMG *
80 مل 1 م مخزون أنابيب (80 ملم أنابيب)
2 مل 1 M MgSO 4 مخزون (2 ملي MgSO 4 )
2 مل 0.5 مليون سهم EGTA (1 ملم EGTA)
600 مل جلسرين
الماء المقطر إلى 900 مل ، ويخلط جيدا
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 6.9
الماء المقطر إلى 1 لتر
يخزن في 4 درجة مئوية

برنامج تلفزيوني *
8.18 جم كلوريد الصوديوم (140 ملي كلوريد الصوديوم)
0.186 جم بوكل (2.5 ملي بوكل)
0.218 جم KH 2 ص 4 (1.6 ملم KH 2 ص 4 )
2.15 جرام Na 2 HPO 4 (15 ملم نا 2 HPO 4 )
الماء المقطر إلى 1 لتر
احفظه في درجة حرارة الغرفة

1 مليون MgSO4 الأوراق المالية*
24.074 جم MgSO 4
الماء المقطر إلى 200 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

1 م HEPES ، درجة الحموضة = 7.0 مخزون *
119.15 غ حبيس (حمض خالي)
الماء المقطر إلى 400 مل
أضف عدد قليل من حبيبات هيدروكسيد الصوديوم الصلبة في وقت واحد أثناء الخلط حتى يصبح الرقم الهيدروجيني & # 1266.8
إضافة قطرة هيدروكسيد الصوديوم المركزة لتحقيق الرقم الهيدروجيني = 7.0
الماء المقطر إلى 500 مل
مرشح معقم وتخزينها في 4 درجة مئوية

1 مليون أنابيب ، الرقم الهيدروجيني = 6.9 مخزون *
151.2 جرام أنابيب (حمض خالي)
الماء المقطر إلى 400 مل
أضف عدد قليل من حبيبات هيدروكسيد الصوديوم الصلبة في وقت واحد أثناء الخلط حتى يصبح الرقم الهيدروجيني & # 1266.7
إضافة قطرة هيدروكسيد الصوديوم المركز لتحقيق الرقم الهيدروجيني = 6.9
الماء المقطر إلى 500 مل
مرشح معقم وتخزينها في 4 درجة مئوية

0.5 مليون EDTA من الأسهم *
16.81 جرام EDTA (ملح الصوديوم)
الماء المقطر إلى 90 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0
ماء مقطر 100 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

0.5 مليون سهم EGTA *
19.02 جرام EGTA (ملح الصوديوم)
الماء المقطر إلى 90 مل
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0
الماء المقطر إلى 100 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

1 مليون ديثيوثريتول (DTT) *
1.542 جرام ديثيوثريتول
الماء المقطر إلى 10 مل
توزع في 500 مل قسامات وتخزينها في -20 درجة مئوية

1 مليون بوكل مخزون *
74.55 جم بوكل
الماء المقطر إلى 1 لتر
احفظه في درجة حرارة الغرفة

10 مليون هيدروكسيد الصوديوم *
40 جم هيدروكسيد الصوديوم
الماء المقطر إلى 100 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

100 ملي مخزون MgGTP *
تحقق من وزن صيغة الدفعة من GTP لديك ، وحدد الكمية المطلوبة لـ 10 مل من محلول 100 ملي.
أضف 8.5 مل من الماء المقطر للكمية المحددة
أضف 1 مل من 1 مليون MgSO 4 الأوراق المالية
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0 ،
الماء المقطر إلى 10 مل
صرف في 200 مل قسامات ، تخزينها في -20 درجة مئوية

100 ملي مخزون MgATP *
تحقق من وزن صيغة كمية ATP التي لديك ، وحدد الكمية المطلوبة لـ 10 مل من محلول 100 ملي.
أضف 8.5 مل من الماء المقطر للكمية المحددة
أضف 1 مل من 1 مليون MgSO 4 الأوراق المالية
ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.0
الماء المقطر إلى 10 مل
صرف في 200 مل قسامات ، تخزينها في -20 درجة مئوية

5 مليون كلوريد الصوديوم *
292.2 جم كلوريد الصوديوم
الماء المقطر إلى 1 لتر
احفظه في درجة حرارة الغرفة

3.6 مم بريفيلدين أ *
10 مجم Brefeldin A (متوفر من Epicenter Technologies Madison ، WI)
المطلق من الإيثانول إلى 12 مل
يخزن في -20 درجة مئوية

30 × ناف *
378 مجم NaF (0.9 M NaF)
الماء المقطر إلى 10 مل
تخزينها في -20 درجة مئوية

30 × AlCl3*
20 مجم (1.5 ملي AlCl 3 )
الماء المقطر إلى 100 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

30 ملي Mg GTP-g-S *
10 ملغ GTP-g-S ملح رباعي الليثيوم (متوفر من Boehringer Mannheim & # 35220467)
18 مل 1 M MgSO 4 مخزون (30 ملي MgSO 4 )
أضف 572 مل من الماء المقطر (إلى 592 مل)
تخزينها في -20 درجة مئوية


150 ملي ملغ AMP-PNP *
25 مجم AMP-PNP (متوفر من Boehringer Mannheim & # 35102 547)
90 ماي 1 م MgSO 4 مخزون (150 ملي MgSO 4 )
أضف 225 مل من الماء المقطر (حتى 315 مل)
تخزينها في -20 درجة مئوية


100 ملي orthovanadate الصوديوم *
1.839 جرام orthovanadate الصوديوم
الماء المقطر إلى 8 مل في أنبوب غطاء المسمار
ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 10
إذا كان المحلول أصفر ، ضعه في الماء المغلي حتى يتضح
أعد فحص الرقم الهيدروجيني ، كرر حسب الضرورة
التكيف مع التركيز النهائي عن طريق فحص A265 نانومتر ، تحويلة. المعامل = 2925 م -1 سم -1 مع إضافة الماء المقطر حسب الحاجة
يخزن في -20 درجة مئوية


3 مليون كي *
4.98 جرام كي
أضف الماء المقطر إلى 10 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة


0.5 م نا2كو3*
531 مجم Na 2 كو 3
أضف الماء المقطر إلى 10 مل
احفظه في درجة حرارة الغرفة

مرق L B
في 1 لتر من ddH 2 يا ، اجمع:
10 جرام باكتو تريبتون
5 غرامات من خلاصة الخميرة
5 جرام كلوريد الصوديوم
يحرك حتى يذوب.


شاهد الفيديو: مدخل إلى علم الأحياء. العلوم العامة. مقدمة إلى الأحياء (أغسطس 2022).