We are searching data for your request:
Upon completion, a link will appear to access the found materials.
لا يقوم بوليميراز T7 بنسخ جميع التسلسلات بشكل جيد ، يمكن أن تختلف كفاءة التحويل بشكل كبير بالنسبة للتسلسلات المختلفة. أحد المتطلبات المعروفة لبوليميراز T7 هو أن التسلسل يجب أن يبدأ بـ 2-3 جوانين من أجل النسخ الفعال.
هل هناك أي أدبيات حددت كميًا تأثيرات التسلسل على كفاءة النسخ؟ أنا مهتم في الغالب بتأثير النيوكليوتيدات القليلة الأولى ، حيث إن تغيير أجزاء أخرى من التسلسل غير ممكن عادة.
الجزء الأكثر أهمية إلى حد بعيد هو بداية النص ، خاصةً الموضعان +1 و +2. تسلسل الإجماع المحفوظ في مروجي الفئة III T7 هوGGGAGA، فإن أي تغييرات في النيوكليوتيدات الأولين تقلل بشدة من كفاءة النسخ. التغييرات في المواضع +3 إلى +6 لها تأثيرات أصغر بكثير.
بالإضافة إلى ذلك ، يبدو أن التغييرات التي وضعت العديد من أزواج قاعدة AU في تلك المنطقة (مثل GGUUU) تؤثر سلبًا على كفاءة النسخ.
التسلسلات الأخرى التي تمثل مشكلة في أي مكان ، ليس فقط في البداية هي امتدادات طويلة من اليوريدينات أو الأدينينات. يمكن أن تتسبب التسلسلات التي تحتوي على ثمانية أو أكثر من اليوريدينات أو الأدينينات في انزلاق البوليميراز ، مما ينتج عنه نصوص تحتوي على عدد أكبر من اليوريدينات أو الأدينينات مقارنة بالقالب.
تم تفصيل هذه الخصائص في ورقة من Milligan و Uhlenbeck من عام 1989.
Milligan ، J.F & Uhlenbeck ، O. C. توليف RNAs الصغيرة باستخدام T7 RNA polymerase. ميث. انزيم. 180 ، 51-62 (1989).
هل هذه معلومات دقيقة؟ هل هو حقا كذلك؟ إذا كان الأمر كذلك ، فهذا رائع)
انها لا ناسبني. من آخر يمكن أن يقترح؟
في رأيي ، يتم ارتكاب الأخطاء. دعونا نحاول مناقشة هذا. اكتب لي في PM.
في ذلك شيء جيد أيضًا ، أنا أؤيد.